背景 重组水蛭素（重组水蛭素）是一种非常具体的和有选择性的凝血酶抑制剂。自1997年以来，已批准用于治疗肝素引起的血小板减少（哈尔滨第二类）。肾功能损害大大延长了半衰期时间。在出血或过量的案件，目前没有解毒药可用。血液滤过已报在R有益的水蛭素消除。在这项研究中，我们确定了筛选，目前在临床医学和重症监护使用两种不同的hemofilters系数（SC）和药物的许可。 方法 我们开发了一个 体外 postdilution血液滤过模型使用500毫升肝素（普通肝素2国际单位/毫升）新鲜人血和碳酸氢盐置换液。被调查的膜高通量聚砜逸F50（1.0米2，费森尤斯）和AN69 Nephral 200（1.05米2，Hospal措贝）。经过平衡，对Lepirudin一丸注入该postfilter港口实现的r -水蛭素的血液中大约15级 克/毫升。串行血液和超滤液样本的的（色法）和控制参数的水蛭素水平的决心。 SC和许可是根据标准计算公式。 结果 观察到的种姓和许可之间差别很大逸F50和Nephral 200（0.60 0.17和21.0 5.9毫升/分钟，分别与0.44 0.09和15.5 三点〇毫升/分钟，分别; P = 0.001）。凝血酶原片段的决心，在实验中发现没有凝血活性。红细胞压积值保持稳定。 结论 我们的数据表明，重组水蛭素可通过血液滤过消除。消除明显的高通量聚砜膜材料取决于所AN69更为有效。这些发现可能是重要的案件和过量的r -连续血液滤过水蛭素剂量的指导方针。 关键词： 膜生物相容性，筛分系数，透析膜，血滤器 1997年以来，重组水蛭素（重组水蛭素）lepirudin已经批准了的免疫形式肝素治疗性血小板减少症（哈尔滨第二类）。另一个重组水蛭素，Desirudin，推出至今血栓栓塞的预防髋关节置换后1。如血栓栓塞治疗的进一步应用2，急性冠脉综合征3，4，败血症及弥漫性血管内凝血（DIC）5，慢性肾脏替代疗法6，7，正在接受调查。 在临床研究与选定的病人群体，重组水蛭素已被证明是一种有效而安全的抗凝血剂。它可以作为一个非常具体的和有选择性的凝血酶形成严密的辅助因子如抗凝血酶抑制剂独立络合物8。这是一个小单链多肽65（分子量6980沓）的迅速分发到细胞外空间（吨氨基酸组成1 / 2 0.1至0.35小时），显示没有相关的蛋白质结合。作为重组水蛭素是几乎完全不变的形式通过肾脏排泄，肾功能损害急剧增加半衰期时间（t1 / 2 ）。在健康志愿者，重组水蛭素在消失的1 / 2 一到两个小时，这与普通肝素相比。在慢性血液透析，消除半衰期是一个因素延长30至40（吨患者1 / 2 36至75小时）。双边切除后，进一步消除延迟（吨1 / 2 160至320小时）9，10，11。在过量的情况下，临床情况复杂的是，目前并没有解毒药可用。因此，严重的可导致出血并发症。在单例，血液已被报为R有益的水蛭素消除12。实验及在肾脏替代疗法使用的膜通透性的临床资料很少，且无结果11，13，14，15。 在此背景下，我们决定执行比较 体外 研究，以确定两个不同的膜目前在间歇式和连续血液滤过废旧物资筛系数（SC）和药物的许可。为了模拟临床相关条件，我们使用肝素在血液超滤回输模式不新鲜人血。 材料 被调查的中空纤维hemofilters是高通量聚砜逸F50（1米表面积2，血室六三毫升，超滤液车厢84毫升; Fresenius医疗保健，德国Bad Homburg）和AN69 Nephral 200（1.05米2，六十四毫升和41毫升; Hospal措贝，里昂，法国）。在重组水蛭素lepirudin（Refludan ®）是从赫司特美罗（法兰克福，德国）。 Ecarin是获得Pentapharm有限公司（巴塞尔，瑞士）。置换液的重碳酸盐SH43 -高能物理和等渗盐水，提供从贝朗席瓦有根（格兰多夫，德国）。转移的血液用于水库，包购自Biotrans（德莱艾赫，德国）。梅瑟医疗技术（沙尔克斯米勒，德国），特别适合生产的一次性使用管系统。我们进行的Hospal BSM22资深大律师的试点工作。 采血 血采自健康志愿者[36 17岁（平均 统计），范围18至64岁]，否认任何已知的影响血小板或凝血药物。经过一前臂静脉，一个干净的塑料套管穿刺进行了仔细的插入。第一个5毫升的血液被丢弃，以避免人为的凝血活性。然后，全血450毫升，收集在一份血液含50转让的肝素钠溶液（肝素猪肝素）达到每毫升2个国际单位的最后肝素浓度，毫升袋。后30分钟内的血液采集，血液滤过试验的开始。 血液滤过模式 那个体外进行血液滤过在postdilution模式进行实验设置显示 图1。新鲜的肝素化全血是再循环的和一一○毫升流速/通过蠕动通过成人的大小血滤器通过泵分钟。收集的超滤液，完全替代的碳酸氢钠液（SH43 -高能物理）4 mval /升补充钾取代。流速为第二次调整，通过蠕动泵按超滤液流量，以避免血液浓缩。实验室化验标本取自预过滤和postfilter端口（P1和P2），连同超滤液从端口3（P3）的样品。 实验过程 实验之前，该系统预充和2升的等渗盐水冲洗。冲洗后，仔细的生理盐水代替人类血液500毫升，和流通已启动。为了让系统和一膜蛋白层的形成平衡，血液滤过未经lepirudin开始。 10分钟后，超滤和替代暂时停止。然后，一丸的r -水蛭素（lepirudin）注入该postfilter端口。经过5年的循环，过滤和替代分钟被重新启动，第一批血液样本（0分）。进一步的血液抽样，每做5分钟的下一个45口预滤波和postfilter分钟。为了让进展，通过超滤液车厢和油管，超滤液个样本70至150秒，不迟于有关血液样本，根据对血滤器过滤室容积。在实验结束时，该系统再次冲洗，直到血液等渗盐水，进行系统的出现宏观干净。在hemofilters被检查凝血。对照实验表演，省略后增加的r -水蛭素超滤和流体替代。 来样加工 血液样本被带到微管（扎尔施泰特，宁布雷希特，德国），其中1 / 10体积0.106 M 柠檬酸对凝血化验或钾乙二胺四乙酸对全血细胞计数（EDTA）的。超滤液样品采集到微管（内特勒Reagiergefä首页1.5毫升）。枸橼酸贫血小板血浆获得通过离心（2000 克，10分钟）。血浆和滤液样品存放在等分深在-70℃冷冻，直到分析。监测酸碱地位和乳酸，电解质水平，血液收集到自充肝素针筒（碧® 70，辐射医学，哥本哈根，丹麦），贮存于4℃，一小时内测量。 实验室分析 血浆水蛭素水平测定采用商用显色检测试剂盒（水蛭素试验;德灵公司，德国马尔堡）计算，即积极自由的功能水蛭素。作为一个控制，血浆水蛭素水平也与coagulometric测定法[ecarin凝血时间（ECT）的]16。冻干Ecarin（50瓶ü）进行了改组，在HEPES缓冲液，pH值7.4含0.025， M 氯化钙。 2.5 ü Ecarin / ml浓度被发现实际应用中最佳。一百Ecarin解决microliters增加了200 升柠檬酸的稀释，抗凝血浆。时间凝固了，直到上注册一架KC 10血凝。抽搐，结果显示对肝素的影响。 凝血酶原片段1和2（1 +2）的血液中确定，超滤液与酶联免疫吸附Enzygnost?车队2微型检测试剂盒（德灵公司）样本，以检测凝血激活的体外循环，这可能导致消费对水蛭素。 血细胞数自动执行用雪兰诺系统9000血液细胞计数器（生化ImmunoSystems，弗赖堡，德国）。血液酸碱状态，乳酸和电解质水平ABL系统上的610（辐射计，哥本哈根，丹麦）进行了分析。 计算 离子水的药物浓度，药品许可使用标准的计算公式所示 表1。
缩写：连续字母i，预过滤等离子水药物浓度;连续Ø，postfilter离子水药物浓度，铜，超滤液药物浓度;连续波，等离子水药物浓度，教研单位，超滤液流量。 统计分析 所有的结果都表示为平均值 结果 图2 描绘了预滤波器等离子?下降一段时间内水蛭素水平（平均 图2。
时间重组过程中的预过滤（R）的水平时，水蛭素 体外 血液滤过。 从同一水平在t = 0分钟开始，重组水蛭素水平（平均 凝血酶原片段1 +2（1 +2作为凝血酶生成标记）仍然在血液车厢不变。要排除通过血液滤过的F1 2消除，我们反复分析滤液没有相关的F1 +2水平的检测样品。因此，没有明显的凝血激活在体外循环。此外，F1的2水平没有差异两国hemofilters。作为标记的体液平衡红细胞压积保持稳定，这表明没有血液浓缩或稀释水蛭素水平的影响在实验中发生的。 讨论 重组水蛭素是越来越多地应用在临床医药作为一种替代抗凝血剂的肝素。意外过量或意外的r积累与肾功能不全患者水蛭素可引起严重的出血并发症。因为没有解毒剂，通过血液已消除这些情况的建议12。尽管如此，对水蛭素渗透目前使用的不同的间歇或连续血液滤过膜（SC）的详细资料是不具备的文献。从它的，药代动力学特征重组水蛭素似乎是为消除物质通过血液合适的，因为它是一个相对较小的分子（6890大），并显示没有相关的蛋白结合8。然而，实验和临床仍未有定论。布哈，Markwardt和诺瓦克与肾切除狗进行实验，显示出与高通量聚砜或对比低通量透析导致血液在几分钟内水蛭素水平的迅速下降AN69透析13。一个小型猪动物研究提供了进一步的证据表明，高通量膜消除在水蛭素有效14。此外，诺瓦克 等 法新社 体外 透析研究与牛血hemophan也高度重组水蛭素渗透，尽管被列为低通量膜15。相对于这些调查结果，Vanholder 等 超滤结束，临床高通量聚砜血液透析无助的r -从人类流通水蛭消除。此外，他们描述 体外 实验证明重组水蛭素和不能通过高通量聚砜膜11。 我们的结果 体外 研究清楚地表明，重组水蛭素（lepirudin）可以通过渗透聚砜和AN69高通量hemofilters。根据我们的结果，膜方面存在的具体分歧，水蛭素的渗透性。 药物与血液滤过清除，是由药物以及膜性能。蛋白结合，分子量和药物，孔径，膜电荷分子负责的主要影响因素。结合蛋白的比例被认为是主要障碍，药物筛选变量。在与血浆蛋白结合的药物清除（“10％），大幅增加血液滤过试验，盐水17。血浆蛋白可形成蛋白层（第二膜）作为一种物理性屏障，它可以显着改变膜透性的运作。因此，实验条件显然似乎发挥关键作用，并要仔细选择。 随着我们的模型，我们试图模仿使用肝素抗凝新鲜全血的临床血液，以保持血液的pH值，血浆蛋白浓度，接近人体的生理范围电解质水平。这一方法应尽量减少分子电荷，水化人为的变化，和蛋白质结合的特点，这可能影响到药物的相互作用，促进膜外推到 体内 情况。我们的目标是确定种姓和间隙的r -水蛭素两个广泛使用的膜具有不同的理化性质。 在所描述的设置 体外 血液模型，高通量聚砜（逸F50）似乎优于AN69（Nephral 200; P “0.01）。控制参数（酸碱状态，红细胞压积，和电解质）无显着差异，表明该实验条件为逸F50和Nephral 200类似。计算种姓和许可不表示通过调查膜自由通行。作为一个较负电荷AN69膜，聚砜相比，明显较弱的重组水蛭素。也许，跨膜运输受到阻碍，静电。此外，血浆蛋白层可大大减少了有效的膜孔径。作为对照实验表明，重组水蛭素无明显的体外吸附电路。水蛭素水平的血时仍然很高超被省略，因此，观察水蛭素水平衰减已被分配到从系统中消除。通过血滤器增加血液流量可能会提高强化超滤重组水蛭素消除。常设委员会应保持不变18。 2 ü抗凝肝素/毫升血液中需要抑制凝血激活流通。凝血酶代会人为地减少了由于水蛭素凝血酶原复合物形成功能分析测量水平。由于血液中的凝血酶原片段，超滤液并没有明显改变，在时间的推移，凝血抑制明显不够。为了确保我们的数据的准确性和检测因素的干扰显色法，血液水平的检查结果与一个独立的方法（ECT）的16。水蛭素水平被排除在进一步分析，如果这两种方法的结果显示，明确不符。 在与其他药物的清除血液滤过评价模型数据与我们的结果比较是困难的，因为没有明显的相关关系分子大小，蛋白结合及公务员事务局存在17，19，20，阻碍了从公务员事务局局长药代动力学数据可靠的预测。此外，结果在很大程度上取决于模型的应用条件，如前文所述。牢记这一点，我们的数据与种姓报道一致为小分子17，18，19，20。在肾功能不全的病人，药物已报告有不同程度的结合蛋白与肾功能正常者，影响了血液滤过清除毒品21。的程度，这种现象可能是重组水蛭素是未知的相关性。 最后，我们表明了这一 体外 研究表明重组水蛭素（lepirudin）能够通过高通量膜hemofilters消除，但消除的程度显然对膜材料而定。在我们的模型，聚砜优于以明显高于平均的AN69 SC和清除。这一发现可能是很重要的治疗的r -水蛭素过量和为间歇性或持续血液滤过剂量准则。 天然水蛭素 http://www.szsjk.com (责任编辑：sampoy) |
统计。这些数据进行统计分析使用Windows和非参数曼酵素7.5惠特尼秩和检验。字母a P 小于0.05的价值被认为是显示显着差异。公务员事务局局长及清拆的计算是根据16个独立的实验，其中包括三个控制实验（ñ = 8每逸F50和Nephral 27和21）的单值分别。
克/毫升， P = NS）的。经过5，10，15和20分钟，重组水蛭素水平明显低于同比Nephral逸F50（P “0.05）。计算许旺和逸F50水蛭素清拆了0.60 
）比Nephral 200（
）。差异有统计学意义的时间点5，10，15和20分钟（P “0.05）。控制实验（系）表明不变重组水蛭素水平[（
）逸F50，（
）Nephral 200]。